Revista de la Sociedad de Medicina Interna
          de Buenos Aires

 Autoanticuerpos más frecuentes  
 en enfermedades del tejido conectivo
 Dra. Miryam Sandra Fernández

Los autoanticuerpos son anticuerpos dirigidos contra antígenos del propio organismo; muchas veces son hallazgos serológicos en pacientes con enfermedades reumáticas sistémicas.
De los anticuerpos identificados hasta ahora, solo algunos tienen importancia en el diagnóstico de las enfermedades reumáticas y pueden considerarse como marcadores serológicos. Otros son característicos de una enfermedad determinada pero no son específicos.

Los anticuerpos reconocen :
- Antígenos localizados en el núcleo: Anticuerpos antinucleares
- Antígenos del citoplasma o de las membranas celulares
- Proteínas nucleares no histonas: Pueden solubilizarse o extraerse de los tejidos con soluciones salinas de baja fuerza iónica ( Antígenos nucleares extraíbles o anticuerpos anti ENA)
- Anticuerpos órgano específicos: Anticuerpos antitiroideos

PRINCIPALES AUTOANTICUERPOS EN REUMATOLOGÍA

GRUPOS ESTRUCTURAS ANTIGÉNICAS AUTOANTICUERPOS
A. Factor reumatoideo  Fragmento Fc de IgG Ig anti IgG (generalmente IgM)
B. Anticuerpos
antinucleares
1) Nucleosoma Anti ADN
Anti histonas
Anti DPN o complejo ADN -Histona (fenómeno LE)
  2) Proteínas no histonas asociadas al ADN  Anticentrómero
Anti Scl 70
Anti Ku
Antiláminas nucleares
  3) Proteínas no histonas asociadas al ARN Anti Sm
Anti U1 RNP
Anti U2 RNP
Anti-hm RNP
Anti Ro/SSA
Anti La/SSB
Anti Jo 1
  4) Nucléolos Antinucleolares
C. Anticuerpos anticitoplasma 
de neutrófilo (ANCA)
Gránulos azurófilos de los neutrófilos Antiproteasa serina y otros (C-ANCA)
Antimieloperoxidasa 
y otros (P-ANCA)
D.Anticuerpos antifosfolípidos Fosfolípidos Anticardiolipinas
Anticoagulante lúpico
Reaginas causantes de serología luética falsamente positiva.


Técnicas de detección de autoanticuerpos

Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)

- Técnica de primera elección para detectar anticuerpos antinucleares (ANA).
- Técnica:
- Se realiza sobre cortes congelados de hígado o riñón de rata y/o monocapas de células tumorales mantenidas en cultivo (HEP-2) de Crithidia Lucillae. La diferencia entre estos dos tipos de sustratos antigénicos está en la cantidad de antígenos nucleares que tienen y por consiguiente la posibilidad de detectar o no un anticuerpo en el suero del paciente con enfermedad reumática. Por ejemplo en el Lupus Eritematoso Sistémico (LES) un 80 - 85 % de las pruebas realizadas con hígado o riñón de rata son positivas, mientras con Células Hep-2 el valor es del 95 % ya que estas últimas son más ricas en antígenos nucleares.
- El sustrato antigénico (antígeno) se fija sobre placas de vidrio y se incuba con el suero del paciente (anticuerpo). Se añade una antiglobulina unida a isotiocianato de fluresceina que permite visualizar la reacción con un microscopio de fluorescencia.
- Los autoanticuerpos clínicamente significativos presentan subclases de IgG específicos, nivelados con la presencia de IgM e IgA ANA específicos, en cambio, en algunos dadores de sangre sanos se encontraron anticuerpos ANA, más adecuados para el diagnóstico. 
- En la mayor parte de los sueros positivos la IFI no identifica el anticuerpo por lo que se deben usar otras técnicas.

Las excepciones son:

- Si se usan células Hep-2 como sustrato pueden detectarse directamente los anticuerpos anticentrómero.
- La IFI sobre homoflagelado de Crithidia Lucilliae permite ver los anticuerpos anti ADN nativo.
- Los anticuerpos antihistona pueden detectarse modificando la técnica de IFI.
- Los diferentes factores reumatoideos (FR) pueden detectarse mediante IFI sobre glóbulos rojos sensibilizados con inmunoglobulina G (IgG)Humana.
- Los anticuerpos anticitoplasma de neutrófilo 
(ANCA) se detectan por IFI sobre neutrófilos humanos fijados con etanol.
- Cuando se utilizan células Hep-2 como sustrato hay que tener en cuenta los diferentes tipos de tinción que se presentan en la IFI, ya que pueden indicar diferentes anticuerpos y por ende diferentes enfermedades.
- Los patrones de tinción encontrados son:
- Homogéneo: presente principalmente en LES, LES inducido por drogas.
- Periférico: LES, Hepatitis crónica activa.
- Moteado grueso: EMTC
- Moteado fino: Síndrome de Sjögren, Esclerodermia
- Nuclear: Esclerodermia, AR
- Centromérica: CREST

RADIOINMUNOANÁLISIS (RIA)

- Se usa principalmente para detectar Anticuerpos anti ADN.
- Se basa en la capacidad del anticuerpo para unirse al antígeno marcado con un isótopo radioactivo.
- Se incuba ADN marcado con el suero del paciente y se forman complejos ADN/anti-ADN y se precipitan dichos complejos con sulfato de amonio (FARR 
clásico) o con polietilenglicol (FARR modificado).
- El marcado con isótopos permite cuantificar el anticuerpo unido.

AGLUTINACIÓN

- Útil para detectar FR, anticuerpo anti ENA y reaginas.
- Se basa en la capacidad de los anticuerpos para aglutinar glóbulos rojos (hemaglutinación) o partículas sintéticas recubiertas con antígenos. La cantidad se expresa como la mayor dilución del suero que produce aglutinación.
- La prueba Waaler-Rose se basa en la capacidad del FR inmunoglobulina M (IgM) para aglutinar glóbulos rojos de carnero sensibilizados con IgG de conejo dirigido contra glóbulo rojo de carnero. Se considera positivo con títulos mayores o iguales a 1/40. 
- La prueba del látex (Singer-Plotz) sustituye glóbulos rojos de carnero por partículas de látex recubiertas por IgG humana purificada. Esta prueba es más sensible y menos específica que la técnica Waaler-Rose. Se considera positiva con títulos mayores o iguales a 1/160.
- Los anticuerpos antifosfolípidos pueden detectarse indirectamente por pruebas reagínicas de serología luética, básicamente la floculación del antígeno es el VDRL y para la aglutinación es el RPR (Rapid Plasma Reagin).
- Para ambos el antígeno es una mezcla de cardiolipinas, lecitina y colesterol.
- La positividad es indicadora de anticuerpos anti fosfolípidos si las técnicas de Inmovilización de treponemas o la IFI son negativas y descartan la existencia de sífilis.

PRECIPITACIONES EN GEL (INMUNODIFUSIÓN Y CONTRAINMUNOELECTROFORESIS -CIE-)

- Son las técnicas más usadas actualmente para detectar anticuerpos anti ENA, también para FR tras realizar inmunoabsorción del suero con IgG solubilizado con IgG agregada.
- Estas pruebas pueden incrementar la sensibilidad de las pruebas hasta un 100 % de tal manera que a mayor sofisticación del laboratorio en relación con estas técnicas menor posibilidad de que haya enfermedades seronegativas.
- Se basa en enfrentar el antígeno y suero del enfermo, colocados en pozos con gel de agarosa. Ambos difunden libremente (inmunodifusión) o en un campo eléctrico (contrainmunoelectroforesis) a través del gel, y al encontrarse originan un precipitado monoespecífico. 
- En general se usa contrainmunoelectroforesis y el sustrato antigénico es: extracto de timo o de bazo o placenta humana para anticuerpos anti RO/SSA
- Los anticuerpos anti SCL-70 se detectan mejor por inmunodifusión.

ELISA

- Significa: enzyme linked inmunoabsorbent assay.
- Es la técnica más sensible porque detecta menor cantidad de anticuerpos.
- Puede usarse para estudiar cualquiera de los anticuerpos anti nucleares.
- Consiste en fijar el antígeno en placas de poliestireno e incubarlo primero con el suero del paciente y después con una anti-inmunoglobulina humana marcada con una enzima.
- Luego de añadir el cromógeno y el sustrato enzimático adecuado, se cuantifica la reacción con un espectrofotómetro.
- La mayor dificultad es la necesidad de purificar el antígeno para que no disminuya la especificidad.

INMUNOBLOTTING

- La técnica consiste en enfrentar el suero del paciente con los antígenos separados mediante electroforesis en geles de poliacrilamida y electrotransferidos a un papel de nitrocelulosa. Los antígenos se solubilizan con dodecil sulfato de sodio (SDS) y mercaptoetanol
- Una vez que se unen a la nitrocelulosa se incuban primero en el suero del paciente y luego con una anti-inmunoglobulina humana marcada con una enzima.
- Al agregar el cromógeno y el sustrato enzimático calculados, se colorea la reacción.

NEFELOMETRÍA LASER

- Detecta y cuantifica los factores reumatoideos IgM según su coeficiente de dispersión.
- Los resultados se expresan en UI/ml y son de valor los niveles mayores o iguales a 60 UI/ml.

INHIBICIÓN COMPETITIVA DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

- Es una prueba funcional.
- Con estas pruebas se identifican los anticuerpos anti Jo-1 dirigidos contra la enzima histidil-t-ARN sintetasa.
- Se usan mucho en la demostración de anticoagulante lúpico circulante, ya que las pruebas coagulométricas pueden ser dependientes de fosfolípidos y se alteran en presencia de anticuerpos antifosfolípido. 
- El anticoagulante lúpico inhibe in vitro la activación de la protrombina por su acción antiprotrombinasa por lo que se prolongan las pruebas de coagulación (KPTT, Tiempo de Cefalina y Tiempo de Inhibición de Tromboplastina Hística Diluida)
- La prolongación no se corrige al agregar plasma normal, por lo que la alteración no se debe al déficit de alguno de los factores de coagulación.

Principales asociaciones clínicas de los autoanticuerpos en enfermedades reumáticas

GRUPOS  AUTOANTICUERPOS  ENFERMEDADES
A. Factor reumatoideo  IgM anti IgG  Artritis reumatoidea (AR) a títulos altos / Conectivopatías
Vasculitis
B. Anticuerpos anti- nucleares Anti ADN nativo  Lupus Eritematoso Sistémico (LES)
   Anti Histonas  LES inducido por fármacos / LES / AR / Artritis crónica juvenil
  Anti RNP Enfermedad mixta del tejido conectivo (EMTC) / LES
  Anti SM LES
  Anti RO/SSA Síndrome de Sjögren / LES / Lupus neonatal
LES cutáneo subagudo / LES asociado a déficit de Complemento
  Anti LA/SSB Síndrome de Sjögren / LES
  Anti SCL 70 Esclerodermia difusa
  Anti centrómero  Esclerodermia forma CREST
  Anti JO 1 Polimiositis (PM) con enf. pulmonar intersticial
  Antinucléolo Esclerodermia
C. Anticuerpos
anticitoplasma
de neutrófilos 
C -ANCA
P-ANCA
Predictivo en Granulomatosis de Wegener (GW)
Predictivo en otras vasculitis ANCA positivos
D. Anticuerpos
Antifosfolípidos
Anticoagulante Lúpico Anticardiolipina 
Anti U1 RNP
Síndrome antifosfolípido primario / LES
 EMTC / LES

Correlación clínica  de los autoanticuerpos 

FACTOR REUMATOIDEO (FR)

En general se trata de una IgM anti IgG.
Su principal indicación es para diagnóstico de AR.
En la AR es policlonal, pero en las crioglobulinemias y en el Síndrome de Sjögren puede ser monoclonal.
Es un anticuerpo poliespecífico que puede activar el complemento y que puede reaccionar con:

- Diferentes determinantes antigénicos del fragmento Fc de la IgG
- Con neoantígenos formados por la IgG en inmunocomplejos
- Con antígenos nucleares
- Con grupos haptenos dinitro o trinitrofenol.

Se detecta por pruebas: 
- De aglutinación 
- Con glóbulos rojos de carnero sensibilizados (Waaler-Rose) que es de menor sensibilidad 
- Con glóbulos rojos de conejo (Rose-Ragan) hay menor sensibilidad pero mayor especificidad.
- Aglutinación del Látex: donde se usa látex como soporte de la IgG de conejo.

- Métodos de detección cuantitativos:
- Son más rápidos y sencillos 
- Nefelometría: puede detectar FR de tipo IgM o A que no aparecen en el látex, constituyéndose en el llamado "Factor Reumatoideo Oculto"
- Inmunoturbidimetría.

Es característico de la AR (70 - 90 % de los pacientes con FR positivo).
Es criterio diagnóstico de la enfermedad pero su negatividad no la excluye. Los títulos positivos son mayores a 1/60 y son específicos para AR.
Puede estar en 5 - 10 % de individuos sanos pero no tiene valor diagnóstico o pronóstico. La frecuencia de los positivos aumenta con la edad.
El FR suele ser consecuencia de una estimulación antigénica crónica.
También puede estar en otras enfermedades, por lo que su determinación sólo es útil como un dato diagnóstico más de la AR (Ej.: cirrosis biliar primaria,etc).
A continuación se enumeran las enfermedades donde puede presentarse el FR positivo:

Los títulos aumentados de FR en presencia de inflamación articular son muy sugerentes de AR pero también pueden verse en Crioglobulinemia mixta o primaria o en Macroglobulinemias.

Para medir actividad en forma aislada se deben usar otros marcadores a parte del FR en la AR; éstos son:

• PCR • VSG • C4 
• Complemento hemofílico total

Las AR seropositivas tienen con mayor frecuencia:
- Nódulos reumatoideos
- Vasculitis
- Afectación pulmonar
- Niveles disminuidos de complemento sérico
- Aumento de inmunocomplejos circulantes
Las AR seronegativas tienen peor pronóstico.
Las enfermedades reumáticas con FR usualmente negativo son:
Osteoartosis
Polimialgia reumática
Enfermedad por depósito de cristales
Enfermedad metabólica endocrinológica
Enfermedad de Lyme
Amiloidosis
Infecciones por parvovirus
Enfermedad de tejidos blandos

Enfermedades 
reumáticas
AR (70 - 90 %)
SS (75 - 95 %)
EMTC (55 %)
LES (15 - 35 %)
PM-DM* (5 - 10 %)
CRIOGLOBULIN**
(70 %)
ESCLERODERMIA (25%)
Enfermedades 
Oncohemáticas
Mieloma
Macroglobulinemia
Leucemias
Linfomas
Neoplasias sólidas
Enfermedades 
inflamatorias 
crónicas
Bronquitis crónica
Asma
Neumoconiosis
Fibrosis pulmonar 1°
Sarcoidosis 
Hepatopatías 
crónicas
Glomerulopatías 1°
Asbestosis – 
Silicosis 
Enfermedades 
infecciosas
Bacterianas:
Endocarditis,Sífilis Lepra,TBC, 
Salmonella, etc.
Virales:
Hepatitis, Influenza, MNI.
Parasitarias:
Leishmania,Filaria, Tripanosoma, 
Malaria
Otras enfermedades 
IAM
Transplante renal
Toxicomanías
DBT, etc.
**Crioglobulinemia * Dermatopolimiositis

ANTICUERPOS ANTINUCLEARES POSITIVOS MEDIANTE IFI (AAN o FAN o ANA)

Son un grupo de autoanticuerpos no especie específicos dirigidos contra componentes del núcleo celular.
Es el análisis de primera elección para el diagnóstico de las enfermedades del tejido conectivo.
La frecuencia de ANA séricos en la población varía en función de la edad y del sustrato antigénico usado, ya que el número de positivos aumenta con la edad y es mayor en la IFI sobre células Hep-2.
Los títulos mayores a 1/160 sobre tejido congelado y a 1/640 sobre células Hep-2, suelen verse en pacientes con enfermedades reumáticas sistémicas.

IFI: Es el método más utilizado ( y el que en este apartado se describe ). Detecta si el suero de un paciente con una enfermedad reumática tiene anticuerpos contra un autoantígeno celular. Para demostrarlo hay una reacción antígeno-anticuerpo. El suero del paciente (anticuerpo) y un sustrato rico en antígenos nucleares (antígeno).

Inmunoelectroforesis

Inmunoprecipitación

Inmunotransferencia

Estas pruebas pueden incrementar la sensibilidad hasta un 100% de tal manera que disminuye la posibilidad de seronegativos

Los ANA deben considerarse una prueba de "screening" en todo paciente que se sospeche una enfermedad reumática inflamatoria; su positividad nos obliga a investigar específicamente el sistema responsable. 
También se debe recordar que los ANA además de contribuir al diagnóstico de la enfermedad son útiles para establecer asociaciones con diferentes manifestaciones clínicas.
Los diferentes autoanticuerpos producen imágenes (patrones de tinción que les son característicos); estos patrones pueden sugerir la presencia de autoanticuerpos específicos que pueden diferenciarse entre sí por patrones de tinción. 

Autoanticuerpo  Enfermedad
Anti ADN LES cutáneo y renal
Anti Sm LES
Anti SCL 70 Esclerodermia
Anti centrómero CREST
FR AR
Anti Jo-1 Dermatopolimiositis
Autoanticuerpo  Enfermedad
Anti SSA/Ro, 
anti SSB/LA
SS, LES seronegativo, LES neonatal
Anti RNP EMTC
Anti cardiolipina LES, Sind. Antifosfolípido
ANCA  Granulomat. de Wegener

Interpretación de resultados:

Reacción negativa 

Una muestra se considera negativa si la imagen nuclear específica es menor o igual que la del control negativo. Las muestras pueden exhibir distintos grados de fluorescencia inespecífica debida a los anticuerpos heterófilos o bajos niveles de autoanticuerpos constituyentes del citoplasma, tales como proteínas contráctiles.

Reacción positiva

Una muestra es considerada positiva si la imagen nuclear específica observada es mayor que la del control negativo.

En cuanto a los patrones son muy útiles en el caso del moteado granular grueso ya que indica presencia de anticuerpos anticentrómero y se asocia con el Síndrome de CREST (Calcinosis +Raynaud + Hipomotilidad esofágica + Esclerodactilia + Telangiectasia), también sugiere títulos altos de anticuerpo anti Sm (LES), anti RNP ( EMTC ), anti SCL-70 ( Esclerodermia ), anti SSB (Sind. de Sjögren- sicca); bajos títulos sugieren otras enfermedades del tejido conectivo.
El patrón nucleolar es frecuente en Esclerodermia y puede verse en LES y Síndrome de Sjögren.
La patente homogénea con títulos elevados sugiere LES, títulos bajos sugiere LES u otras enfermedades del tejido conectivo.
La patente periférica sugiere lo mismo que la patente homogénea.
La patente centromérica sugiere CREST y Síndrome variante de la esclerosis sistémica progresiva (PSS).
La patente mitocondrial indica cirrosis biliar primaria y determina varios tipos de antígenos mitocondriales
Es importante tener precaución al usar patentes para determinar autoanticuerpos específicos salvo para las imágenes nucleolar y centromérica donde los antígenos están muy bien definidos y la patente es característica, puesto que muchos autoanticuerpos o combinaciones de ellos pueden inducir imágenes homogéneas o moteadas, en estos casos se recomienda realizar test específicos para los anticuerpos (tales como a-DNA y ENA).
Los ANA son muy sensibles para el LES (95 - 100 %) y pueden aparecer títulos bajos en individuos sanos. 
Otras enfermedades pueden tener ANA positivos como:

• EMTC (95 %)
•Polimiositis (70 - 90 %)
• Sind. de Sjögren (70 - 90 %) 
• LES inducido (95 - 100 %)
• Esclerodermia (70 - 90 %)
• AR (50 %)

El uso de FAN es para ayuda en el diagnóstico de enfermedades del tejido conectivo pero tiene baja utilidad para seguimiento de pacientes.
Puede haber ANA positivos en otras enfermedades como por ejemplo las neoplasias y las infecciones hepáticas y los procesos inflamatorios.

ANTICUERPOS ANTI ADN NATIVO

Las mejores técnicas para detectar Anticuerpos anti ADN nativo son por su especificidad: 
• RIA: Es la más sensible; detecta anticuerpos de alta avidez.
• IFI: Es el más usado por ser más específico
• ELISA: Altamente sensible porque detecta anticuerpos de alta y baja avidez.

Se considera con títulos positivos si éstos son mayores a 1/20. Se informa como positivo o negativo.
La presencia de Ac anti ADN nativo se considera como patognomónica de LES.
Se detecta en 60 - 70 % de casos. Este porcentaje puede aumentar si se considera sólo en enfermedad activa. 
Se caracterizan por aparecer antes del brote y desaparecer durante el mismo.
Su presencia se correlaciona con:
• Nefropatía lúpica
• Manifestaciones neurológicas lúpicas.

El aumento es inversamente proporcional a la disminución de C3.
Los niveles persistentes aumentan o disminuyen y parecen asociarse a un mejor pronóstico.

ANTICUERPOS ANTIHISTONAS

Pueden reaccionar con fracciones aisladas del complejo ADN histonas o con el octámero formado por los dímeros H1, H2A, H2B, H3, H4.
Son característicos del LES inducido por fármacos en un 90 %.
Se detectan en más del 50% de pacientes con lupus espontáneo sin correlación clínica especial, y aparecen en otros procesos y en individuos sanos.
En lupus inducido por procainamida y en lupus espontáneo predominan los anticuerpos dirigidos contra H1 y H2A-H2B y en el lupus inducido por hidralazina suelen reaccionar con H3-H4.
Es frecuente la reacción cruzada entre anticuerpos anti-histona y FR.
Puede dar positivo en AR y Síndrome de Felty ocasionalmente.

Grupos Ac anti ADN doble cadena o bicatenario Sin reacción cruzada con ADN monocatenario (son de baja 
frecuencia).
Con reacción cruzada con ADN monocatenario o Anti ADN 
Nativo (son específicos de LES)
  Ac anti ADN monocatenario o desnaturalizado Sin reacción con ADN bicatenario
Son inespecíficos ya que se 
detectan en LES o en cualquier proceso inflamatorio


ANTICUERPOS CONTRA ANTÍGENOS NUCLEARES EXTRAIBLES (ENA)

Estos anticuerpos se detectan por inmunodifusión radial (Ouchter Loney)
Con esta técnica se logran identificar anticuerpos dirigidos a un panel de ENA compuesto por:

• SSA/RO • SSB/LA
• Sm • RNP
• Scl 70 • Jo-1


ANTICUERPOS ANTI-SM Y ANTI-RNP

Los antígenos Sm y RNP están muy relacionados.
Pueden diferenciarse mediante digestión enzimática, ya que el Sm es resistente a ARNsa y tripsina y el RNP es sensible. 
Están compuestos por ribonucleoproteínas nucleares de pequeño tamaño "SMALL NUCLEAR RIBONUCLEO PROTEIN" (snRNP).
Los anticuerpos anti Sm precipitan snRNP que contienen varios tipos de ARN (U1, U2, U4, U5 y U5-ARN), y reconocen en inmunoblotting los polipéptidos BB yD. 

Reaccionan con una fracción libre del antígeno Sm y con otra asociada al antígeno RNP.
Los anticuerpos anti RNP precipitan exclusivamente U1-ARN y reaccionan con los polipéptidos 68 y 70 KD, A y C.
Existen reacciones cruzadas entre algunos péptidos incluidos en las partículas snRNP.
Los anticuerpos anti-Sm son específicos en un 99 % para LES y forman parte de los criterios diagnósticos. 
Se relacionan con actividad de la enfermedad. 
Se detectan en un 30 - 40 % de casos. Son de menor frecuencia en individuos de raza blanca.
Se asocian con mayor prevalencia a:

• Fenómeno de Raynaud • Leucopenia
• Fibrosis pulmonar • Pericarditis 
• Vasculitis • Nefropatía
• Afección neurológica

Los anticuerpos anti-RNP se detectan en un 95 -100 % de pacientes con EMTC, pero no son específicos.

Aparecen también en:
• LES (30 - 50 %) 
• Polimiositis • Esclerodermia 
• otras enfermedades del tej. conectivo

Los títulos elevados en ausencia de otros anticuerpos son característicos de la EMTC. Están en un 40 % en el LES.
Los anticuerpos anti 70 KD son de la EMTC y los anti A y anti C sin anti 70 KD del LES.
Los anticuerpos anti RNP se asocian con una mayor incidencia de:
• Artritis • Fenómeno de Raynaud
• Serositis • Edemas en las manos
• FR • Esclerodactilia
• Hipomotilidad esofágica
La Nefropatía es poco frecuente


ANTICUERPOS ANTI SCL - 70 Y ANTICENTRÓMERO

El antígeno Scl-70 es una proteína cromosómica identificada como la enzima ADN topoisomerasa 1. 
Son específicos para esclerodermia y aparecen en hasta un 40 % en la esclerodermia difusa y en un 10 - 15 % en el síndrome de CREST.
Se asocian con la esclerosis cutánea difusa y con mayor riesgo de fibrosis pulmonar.
Los anticuerpos anticentrómero reconocen proteínas laminares del quinetocore cromosómico, especialmente la de 19 KD.

Se detectan en pacientes con: 
Síndrome de CREST (70 - 85 %) 
Esclerodermia difusa (10 - 30 %)
En un pequeño número con otras conectivopatías.

Se asocian con mayor frecuencia de:
• Calcinosis 
• Fenómeno de Raynaud
• Hipomotilidad esofágica
• Esclerodactilia 
• Esclerosis cutánea difusa (baja incidencia)
• Afección cardiopulmonar 
• AR

ANTICUERPOS ANTI-RO/SSA Y ANTI-LA/SSB

Los antígenos Ro/SSA y La/SSB son complejos ribonucleoproteicos de pequeño tamaño que se localizan en el núcleo y en citoplasma (scRNPs).
Los anticuerpos anti Ro producen IFI nuclear sobre células Wil-2 o KB en interfase, precipitan varios ARN humanos (hY-1-5) y reconocen isoformas de al menos dos proteínas aunque reaccionan preferentemente con el antígeno Ro nativo.
Los anticuerpos anti La precipitan los mismos ARN y otros de origen humano y vírico. Reconocen una proteína muy susceptible a la degradación proteolítica.
Los anticuerpos anti Ro detectan:
• Síndrome de Sjögren primario (60 - 70 %)
• LES (30 - 40 %) 
• Otras conectivopatías

Son característicos del:
• Lupus neonatal
- Lesiones cutáneas 
- Bloqueo cardíaco congénito 
- En recién nacidos cuya madre presenta 
anticuerpos anti Ro
• Lupus cutáneo subagudo 
(lesiones eritematosas fotosensibles, 
anulares o psoriasiformes).
• Lupus AAN negativos
• LES asociado a deficiencias homocigotas de las fracciones C2 y C4 del complemento.
• Lupus asociado a deficiencia de complemento

Los anticuerpos anti Ro se han asociado a LES con mayor frecuencia de lesiones cutáneas fotosensibles, trombocitopenia, FR y vasculitis cutánea.
En el Síndrome de Sjögren primario se asocian con manifestaciones extraglandulares (adenopatías, púrpura, vasculitis y afección neurológica), citopenias, crioglobulinemias y FR.
Los anticuerpos anti La se detectan en el Síndrome de Sjögren primario (50 - 60 %), LES (10 - 15 %) y en otras Conectivopatías. 
Los anticuerpos anti La pueden aparecer junto a los anticuerpos anti Ro.

ANTICUERPOS ANTI Jo 1

En pacientes con polimiositis se han identificado diferentes anticuerpos:
• anti PM1 • anti Mi 1 y 2 • anti Jo 1

La mayoría reconocen enzimas sintetasas t-ARN y se asocian con miositis y enfermedad intersticial pulmonar.
Los más frecuentes son los anticuerpos anti-Jo 1, que reconocen una subunidad de la enzima histidil-t ARN sintetasa.
El antígeno puede expresarse en el núcleo y en el citoplasma.
Los anticuerpos anti Jo-1 son específicos de polimiositis, se detectan en 20 - 30 % de los casos.
Se asocian con una mayor incidencia de:
• Enfermedad intersticial pulmonar 
• Artritis
• Fenómeno de Raynaud

ANTICUERPOS ANTICITOPLASMA DE NEUTRÓFILOS (ANCA)

Los ANCA fueron definidos mediante IFI como anticuerpos contra estructuras citoplasmáticas de neutrófilos en sueros de pacientes con vasculitis.
Los ANCA reaccionan con diferentes proteínas de los gránulos azurófilos del neutrófilo.
La IFI sobre neutrófilos fijados con etanol muestra dos patrones fundamentales:

Los ANCA aparecen en general en pacientes con vasculitis y glomerulonefritis necrotizante.
Son también ANCA positivos la granulomatosis de Wegener y la poliarteritis nodosa microscópica porque comparten algunos mecanismos patogénicos.
La negatividad de los ANCA no excluye ninguno de los diagnósticos.
Los ANCA son marcadores útiles de la evolución de la enfermedad ya que:

• En la granulomatosis de Wegener el patrón es C-ANCA y pueden detectarse en más de un 90 % de pacientes con enfermedad activa.
• En las formas limitadas el porcentaje de 
positivos disminuye a un 60 - 70 %.
• En los casos de remisión clínica baja a un 30 %
• La reducción de los niveles de ANCA también es importante cuando hay remisión inducida por el tratamiento; se producen nuevas elevaciones en las recidivas.

En el 80 % de los pacientes con glomerulonefritis necrotizante segmentaria dentro o fuera del contexto de una vasculitis necrotizante sistémica, se detectan P-ANCA.
También la glomerulonefritis necrotizante puede estar asociada a hemorragia pulmonar o síndrome pulmonar-renal.
Las lesiones glomerulares son parecidas a las que se presentan en las afecciones renales por granulomatosis de Wegener.
Estos patrones P-ANCA están dirigidos contra mieloperoxidasa en el 61 % de los casos, pero hay un 39% que presenta patrones C-ANCA.
Puede haber ANCA en suero de pacientes con:
• Policondritis recidivante 
• Nefropatía IgA 
• Colitis ulcerosa
• Un pequeño porcentaje con LES tiene anticuerpos antielastasa y sus sueros originan patrones P-ANCA en la IFI sobre neutrófilos.


ANTICUERPOS ANTIFOSFOLÍPIDOS, ANTICOAGULANTE LÚPICO Y ANTICARDIOLIPINAS

Son anticuerpos que reaccionan cruzadamente con varios fosfolípidos, como:
• fosfatidiletanolamina 
• fosfatidilserina 
• fosfatidilinositol
Son anticuerpos poliespecíficos de clase IgG o IgM que reaccionan cruzadamente con ADN y En el 80 % de los pacientes con glomerulonefritis necrotizante segmentaria dentro o fuera del contexto de una vasculitis necrotizante sistémica, se detectan P-ANCA.

Anticuerpos responsables de falsos positivos en la serología luética 
Dirigidos contra antígenos como el VDRL o el RPR.
Formados por: lecitina, cardiolipina y colesterol

Anticoagulante lúpico 
Factores capaces de inhibir en vitro las pruebas de coagulación dependientes de fosfolípidos, pero in vivo carecen de efecto anticoagulante.
Actúan a nivel del complejo de conversión de protrombina en trombina, inhibiendo la formación de protrombina y trombina.

Anticuerpos anticardiolipinas 
Se unen in vitro a fosfolípidos cargados negativamente (fosfatidilserina, fosfatidilglicerol o fodfatidilinositol)

La presencia de anticuerpos antifosfolípidos se debe sospechar ante cualquier falso positivo en la serología de lúes o en presencia de alargamiento en el tiempo de tromboplastina parcial activada por anticoagulante lúpico; ambas pruebas son poco sensibles por lo que se realiza detección de anticuerpos anticardiolipinas por ELISA. Los anticuerpos antifosfolípidos se detectan en un bajo porcentaje de personas sanas y en el curso de múltiples enfermedades a saber:

Enfermedades reumáticas 
LES
LES inducido por fármacos
EMTC
SS
Esclerodermia
Vasculitis
AR
ACJ 
Enfermedades Infecciosas 
Sífilis
Lepra
TBC
Ricketosis
Enfermedad de Lyme
Mononucleosis
HIV
Otras enfermedades víricas
Pneumocystis carinii
Otras enfermedades 
DBT mellitus
Enf. de Gaucher
Enf. de Degos 
Deficiencia de factores de la coagulación
Hepatopatías 
Otras enfermedades Autoinmunes 
Anemia hemolítica autoinmune 
Tiroiditis de Hashimoto 
Púrpura trombopénica idiopática
Exposición a drogas 
Fenotiazinas
Clorpromazina

Las manifestaciones asociadas a la presencia de anticuerpos antifofolípido son:
• Trombopenia
• Trombosis venosas o arteriales
• Anemia hemolítica
• Livedo reticularis
• Migrañas 
• Úlceras en miembros inferiores
• Valvulopatías 
• ACV agudos
• Abortos recurrentes

Este síndrome asociado a la presencia de anticuerpos antifosfolípidos puede aparecer en el curso de LES u otras patologías, pero muchos pacientes con estos anticuerpos no presentan ninguna de las patologías asociadas. En estos casos se habla de síndrome antifosfolípido primario.

Criterios diagnósticos para el anticoagulante lúpico:
a) Prolongación del tiempo de coagulación in vitro en una prueba fosfolípido dependiente.
b) Evidencias negativas usando mezclas con plasma normal: el tiempo de coagulación no se corrige.
c) Evidenciar la dependencia de fosfolípidos: el tiempo de coagulación se corrige cuando se agrega al sistema una fuente de fosfolípidos que pueden ser plaquetas o fosfolípidos puros.
d) Ausencia de déficit de algún factor de coagulación o de otro inhibidor específico.

Principales técnicas dependientes de fosfolípidos que se realizan en el laboratorio:
• KPTT
• Tiempo de coagulación con caolín (KCT)
• Tiempo de veneno de víbora de Rusell diluido (DRVVT).

Los anticuerpos anticardiolipinas se estudian por RIA y ELISA.
Estos anticuerpos se dirigen a cardiolipinas puras y hacia un cofactor plasmático, la ß2 glicoproteína I, unido o no a las cardiolipinas.
Se deben determinar junto con el anticoagulante lúpico ante la sospecha de síndrome antifofolipídico.
Si ambos resultados son positivos, significa que aumenta el riesgo de sufrir:

• Trombosis venosa y arterial 
• Pérdida fetal recurrente
• Trombocitopenia

BIBLIOGRAFIA

Roig Escofe D. Artritis reumatoide. En: Farreras Rozman.Tratado de
"Medicina Interna". 13ra Ed. 1997;
Sec.7: 1008-1009.

Vilardell Tarnés M. y Ordi Ros J. Lupus eritematoso sistémico. En: Farreras Rozman.Tratado de "Medicina Interna". 13ra Ed. 1997; Sec. 7: 1094.

Vilardel Tarnés M y Fonollosa Pla V. Esclerodermia. .En: Farreras Rozman.Tratado de "Medicina Interna". 13ra Ed. 1997; Sec.7: 1098-1099.

Font Franco J y Cervera Segura R. Enfermedad mixta del tejido conjuntivo y síndromes de solapamiento.
En: Farreras Rozman.Tratado de
"Medicina Interna". 13ra Ed. 1997;.
Sec. 7: 1102-1103

Font Franco J y Khamashta MA. Síndrome antifosfolípido. En: Farreras Rozman.Tratado de "Medicina Interna". 13ra Ed. 1997;. Sec.7: 1104-1105, 

Gil Aguado A, Herrero Mateu C, Alvaréz de Mon Soto M et al. Vasculitis. En: Farreras Rozman.Tratado de "Medicina Interna". 13ra Ed. 1997;. Sec.7: 1106-1108

Tate GA. Exámenes de Laboratorio y Líquido Sinovial. En: Branco Mautner y coeditores."Medicina". Fundación Favaloro. 1ra. Ed. 1999; cap. XIV: 1527-1531
Molina J. "Fundamentos de medicina en Reumatología".Corporación para Investigaciones Biológicas (CIB) Medellín Colombia. 4ta. Ed. 1997; cap. 6

Vinicio Caballero Uribe C."Fundamentos de Reumatología en la Clínica". Actualizado año 2000; Cap. VI. Internet: http://c8721390.tripod.com

Carreño Pérez L y López Longo J. Autoanticuerpos. Medicine 1993; 7: 384-393.

Bachiller Corral J, Zea Mendoza A et al. Artritis Reumatoide (II). Medicine 1998; 26: 1026-1033

Font Franco L, Cervera Segura R y Khamashta MA. Síndrome Antifosfolípido. Medicine 1998; 27: 1064-1069

Alina Díaz Concepción. El síndrome antifosfolípido. Revista Cubana de Hematología, Inmunología y
Hemoterapia 1998;14 (2):67-79

Artículo: Inmunofluor ANA Actualizado al 18-06-1999
Internet: www.Biocientifica.com.ar/español/instructivos/inmuno_ANA

Artículo: Inmunofluor-ANA Hep-2
Actualizado al 01 - 01 - 2001. 
Internet:
www.Biocientifica.com.ar/español/instructivos/inmuno_ANA_Hep_2

Diez E, Andreu JL, y col.
Poster 130: ¿Predice el perfil basal de anticuerpos antígenos extractables nucleares (ENA) la afectación de órgano o sistema futura en lupus eritematoso
sistémico?. Servicio de Reumatología. Clínica Puerta de Hierro de Madrid. Año 1999. 

Fernández-Espartero MC, López-Longo FL, y col. Poster 132: Significado clínico de los anticuerpos
ANTI-Ro/SS-A 52 KD desnaturalizado en pacientes con conectivopatías. Servicio de Reumatología y de Inmunología del Hospital Gregorio Marañón de Madrid. Internet: www.medspein.com

Kokuina E, Montero Casimino J y otros.
Determinación de autoanticuerpos por anti Ro/SSA, anti LA/SSB, anti SM y antiU1 RNP por el método de contrainmunoelectroforesis. Instituto de Hematología del Hospital Clínico-quirúrgico "Hermanos Almejeiras" de la ciudad de la Habana. Cuba. Internet: http://bsv.sld.cu/revistas/hih/vol12_1_96